Перечислите основные методы хромосомной инженерии.

Вот что обычно относят к основным методам хромосомной инженерии (и что именно с их помощью делают):

1. Индукция перестроек «в лоб»
   • Ионизирующее излучение (рентген/γ-лучи, быстрые нейтроны) и локальная микрооблучение: вызывают двунитевые разрывы и, как следствие, делеции, дупликации, инверсии, транслокации, кольцевые хромосомы, дицентрики, изохромосомы.
   • Химические мутагены (алкилирующие агенты, этиленимин и др.): аналогично, но мягче управляют спектром разрывов.

2. Управление числом хромосом (геномная инженерия в широком смысле)
   • Индукция полиплоидии (колхицин, оризалин и др.) — удвоение набора хромосом.
   • Получение анеуплоидий за счёт недисъюнкции/ингибирования веретена деления — моносомики, трисомики и т. п.
   • Хромосомная элиминация (селективное удаление целых хромосом, напр. в межвидовых скрещиваниях).
   • Добавочные/замещающие линии (chromosome addition/substitution lines) — введение/замена одной или нескольких хромосом от родственного вида или линии.

3. Соматическая гибридизация и перенос целых хромосом
   • Слияние соматических клеток (межвидовые гибриды) для рекомбинации и переноса крупных блоков генома.
   • Перенос хромосом через микроклетки (MMCT, microcell-mediated chromosome transfer) — адресная доставка конкретной хромосомы в клетку-реципиент.
   • Микроинъекция/микроманипуляции с хромосомами на митотических пластинках.

4. Таргетированное «рисование» перестроек с помощью нуклеаз/рекомбиназ
   • Искусственные нуклеазы (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas): наведение двунитевых разрывов в заданных местах и сборка желаемых событий — инверсий, делеций, дупликаций, нокаутов, точечных транслокаций, больших вставок.
   • Сайт-специфические рекомбиназные системы (Cre/loxP, FLP/FRT, ΦC31/attB-attP, I-SceI и др.): управляемые инверсии/делеции/инсерции крупных фрагментов, «склеивание» либо обмен между выбранными хромосомными позициями.

5. Конструирование и инженерия искусственных хромосом
   • YAC/BAC/PAC — большие клонирующие векторы как каркас для сборки и переносов длинных геномных фрагментов.
   • HAC/MAC (human/mouse artificial chromosomes) — автономные искусственные хромосомы с собственными центромерами/теломерами для стабильной экспрессии/дозирования генов без интеграции в геном.
   • Теломер-опосредованная транкция/удлинение и центромерная инженерия (включая неоцентромеры) — укорочение/реставрация плеч, создание мини-хромосом.

6. Получение и «пересборка» сегментов хромосом
   • Микродиссекция хромосом и микроклонирование — вырезание нужных участков под микроскопом и их последующее копирование/модификация.
   • Сортировка хромосом проточной цитометрией — выделение целых хромосом/плеч по флуоресцентным меткам для отдельных манипуляций.

7. Селекция и фиксация нужных событий (сопутствующие, но ключевые для технологии)
   • Генетические схемы скрещивания/отбора (в т. ч. «мостики» для транслокаций, использование балансовых хромосом).
   • Цитогенетическая верификация (G- и C-бэндинг, FISH/многоцветная FISH, спектральное кариотипирование, CGH) — контроль того, что именно было сконструировано.

Если коротко: классические мутагенез и гибридизация обеспечивают «сырьё» крупных перестроек и изменения числа хромосом; перенос целых хромосом и искусственные хромосомы — управляемую доставку больших блоков; современные нуклеазы/рекомбиназы — точечное наведение инверсий/делеций/транслокаций; а микродиссекция и сортировка дают физический доступ к нужным хромосомным фрагментам. Всё это вместе и составляет арсенал хромосомной инженерии.